瓊脂糖凝膠電泳(Agarose Gel Electrophoresis)
支持介質:瓊脂糖(從海藻中提取的多糖,加熱溶解后冷卻形成多孔凝膠)。
核心特點:孔徑較大(50-200nm)、操作簡單、分辨率適中、成本低。
適用對象:大分子物質,如核酸(DNA/RNA)(常用 1%-2% 瓊脂糖凝膠分離 100bp-50kb 的 DNA 片段)、大型蛋白質復合物。
典型應用:
DNA 片段分離(如 PCR 產物鑒定、酶切片段分析);
核酸純化(切膠回收目標 DNA 片段);
瓊脂糖凝膠電泳結合 EB(溴化乙錠,已逐步被更的 SYBR Green 替代)染色,可直觀觀察核酸條帶。
聚丙烯酰胺凝膠電泳(Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE)
支持介質:丙烯酰胺(Acr)與交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(Bis)聚合形成的凝膠,孔徑可通過調整 Acr/Bis 比例控制(5%-20% 凝膠對應不同孔徑)。
核心特點:孔徑小(1-10nm)、分辨率(可區分分子量相差 1kDa 的蛋白質)、重復性好。
適用對象:小分子物質,如蛋白質、小分子 DNA(<1kb)、RNA。
關鍵分支:
SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉 - PAGE):常用的蛋白質分析技術。SDS 是陰離子去污劑,可使蛋白質變性并結合等量 SDS(每克蛋白質結合 1.4g SDS),消除蛋白質自身電荷差異,僅通過分子大小實現分離,可用于蛋白質分子量測定、純度鑒定。
Native-PAGE(非變性 PAGE):不添加 SDS 和還原劑,蛋白質保持天然構象和電荷,分離依賴 “電荷 + 大小 + 形狀”,可用于分析蛋白質活性、復合物組成。
其他常見類型
電泳類型 支持介質 / 形式 核心應用場景
毛細管電泳(CE) 石英毛細管(內徑 25-100μm) 微量樣品分析(如氨基酸、成分)、DNA 測序(快速)
紙電泳 濾紙 早期氨基酸、小分子肽分離(現已被 PAGE 替代)
等電聚焦電泳(IEF) 兩性電解質凝膠 按蛋白質等電點(pI) 分離,用于蛋白質 pI 測定、復雜樣品預分離
技術優勢與局限性
優勢:
分辨率高:可區分結構 / 性質極相似的物質(如不同亞型的蛋白質、僅差 1 個堿基的 DNA 片段);
樣品用量少:僅需微克(μg)甚至納克(ng)級樣品;
操作靈活:可通過調整介質、緩沖液、電場參數適配不同樣品。
局限性:
部分技術(如 PAGE)操作較繁瑣,對實驗條件要求高(如凝膠制備需避免氣泡);
變性電泳(如 SDS-PAGE)會破壞生物活性,無法用于活性物質純化;
大分子物質(如基因組 DNA)分離效率較低,需結合脈沖場凝膠電泳(PFGE)等特殊技術。
總之,電泳是現代實驗室 “分離分析” 的基石,其技術發展(如與質譜、色譜聯用)進一步拓展了在醫學、組學研究等領域的應用邊界。