瓊脂糖凝膠電泳(Agarose Gel Electrophoresis)
支持介質:瓊脂糖(從海藻中提取的多糖,加熱溶解后冷卻形成多孔凝膠)。
核心特點:孔徑較大(50-200nm)、操作簡單、分辨率適中、成本低。
適用對象:大分子物質,如核酸(DNA/RNA)(常用 1%-2% 瓊脂糖凝膠分離 100bp-50kb 的 DNA 片段)、大型蛋白質復合物。
典型應用:
DNA 片段分離(如 PCR 產物鑒定、酶切片段分析);
核酸純化(切膠回收目標 DNA 片段);
瓊脂糖凝膠電泳結合 EB(溴化乙錠,已逐步被更的 SYBR Green 替代)染色,可直觀觀察核酸條帶。
前處理(關鍵:保證工件表面潔凈,決定涂層附著力)
脫脂:用堿性脫脂劑(如氫氧化鈉、表面活性劑)去除工件表面的油污、灰塵(可采用噴淋或浸泡,溫度 50-60℃,時間 5-10 分鐘)。
酸洗 / 除銹:針對鋼鐵工件,用鹽酸、硫酸溶液去除表面氧化皮和銹蝕(時間 3-8 分鐘,需加緩蝕劑防止過腐蝕)。
磷化:工件浸入磷化液(如鋅系、錳系),表面形成一層致密的磷酸鹽薄膜(厚度 1-5μm),增強涂層與金屬的附著力,提升耐腐蝕性(溫度 30-40℃,時間 5-10 分鐘)。
水洗:用去離子水多次清洗工件表面殘留的化學藥劑,避免污染后續電泳槽液(通常需 3-4 道水洗,后一道為純水洗,電導率<10μS/cm)。
烘干:在 80-120℃烘箱中烘干工件表面水分(時間 15-30 分鐘),避免電泳時出現氣泡或涂層不均。
水洗 1(脫脂后)
目的:沖洗工件表面殘留的脫脂劑,避免帶入后續酸洗 / 磷化槽。
工藝:常溫水洗,時間 1-2 分鐘,可采用噴淋方式提率。
控制:水洗后工件表面 pH 值應接近中性(6-8)。
磷化處理
目的:在工件表面形成一層均勻致密的磷酸鹽結晶膜(厚度 1-5μm),增強電泳涂層的附著力和耐腐蝕性。
工藝:浸入磷化液(常用鋅系、錳系),溫度 30-45℃,時間 5-10 分鐘(噴淋磷化效率更高)。
關鍵:磷化膜應呈灰色或淺灰色,結晶均勻,無露底、發花現象(通過檢測膜重:2-5g/m2)。