電泳(Electrophoresis)是一種利用帶電粒子在電場中定向移動的特性,實現混合物中不同成分分離、分析或純化的核心技術,廣泛應用于生物化學、分子生物學、醫(yī)學檢驗、材料科學等領域。其本質是 “電荷差異” 與 “電場力” 共同作用的結果 —— 不同物質因帶電性質、分子大小、形狀不同,在電場中的遷移速度存在差異,終實現分離。
典型操作流程(以 SDS-PAGE 為例)
凝膠制備:根據目標蛋白質分子量配置凝膠(小分子用高濃度膠,如 15%;大分子用低濃度膠,如 8%),分為 “分離膠”(下層,起分離作用)和 “濃縮膠”(上層,使樣品濃縮成窄帶,提高分辨率)。
樣品處理:蛋白質樣品與 SDS 上樣緩沖液(含 SDS、還原劑 β- 巰基乙醇、溴酚藍指示劑)混合,95℃加熱 5-10 分鐘,使蛋白質變性并結合 SDS。
上樣與電泳:將處理好的樣品加入凝膠加樣孔,同時加入 “蛋白質分子量標準品”(Marker),接通電源(濃縮膠用低電壓,分離膠用高電壓),溴酚藍指示劑遷移至凝膠底部時停止電泳。
檢測與分析:
染色:常用考馬斯亮藍染色(簡單快速,檢測限~0.1μg)或銀染(靈敏度高,檢測限~1ng);
成像與分析:通過凝膠成像儀拍攝條帶,結合 Marker 判斷目標蛋白質的分子量,通過條帶亮度半定量分析蛋白質含量。
關鍵應用領域
電泳技術是生命科學和醫(yī)學的 “基礎工具”,核心應用包括:
分子生物學:DNA/RNA 分離、鑒定、純化(如 PCR 產物驗證、基因克隆中的酶切分析)、核酸測序(毛細管電泳為核心技術之一)。
蛋白質研究:蛋白質分子量測定、純度分析、表達量檢測(如 Western Blot 前的樣品驗證)、蛋白質復合物分離。
醫(yī)學檢驗:臨床診斷(如血清蛋白電泳檢測肝病、腎病,血紅蛋白電泳篩查地中海貧血)、病原體檢測(如病毒核酸電泳鑒定)。
食品與環(huán)境:食品中過敏原(如大豆蛋白、乳蛋白)檢測、環(huán)境污染物(如重金屬離子、農藥殘留)分析。
電泳加工的核心原理
電泳涂裝基于 “電泳、電沉積、電滲、電解” 四大電化學過程,具體流程如下:
電泳:將工件(作為陰極或陽極)與對應的電極板放入含有帶電涂料顆粒(如陽離子樹脂、顏料)的電泳槽中,通直流電后,涂料顆粒因電荷作用向工件表面定向移動。
電沉積:涂料顆粒到達工件表面后,因電場作用發(fā)生電化學反應(如中和、交聯),逐漸沉積形成不溶于水的薄膜。
電滲:沉積過程中,涂層內部的水分在電場作用下向槽液中遷移,使涂層逐漸致密、干燥。
電解:水在電極表面發(fā)生電解反應(陰極產氫氣、陽極產氧氣),此過程需通過工藝控制避免氣泡影響涂層質量。